篇名:
建立以即時聚合?鏈反應技術偵測水禽小病毒Detection of Waterfowl Parvovirus with Real-time Polymerase Chain Reaction
作者:
陳燕萍;李敏旭;李淑慧
中文摘要:
為建立以即時聚合?鏈反應偵測水禽小病毒,利用Applied Biosystems 7500Real-Time PCR System配合SYBR green方法進行水禽小病毒核酸的偵測,鑑於核酸分子方面分為鵝小病毒與正番鴨小病毒,故試驗中選擇病毒基因保留性較高區域,設計鵝小病毒與正番鴨小病毒專一性之引子,建立以即時聚合?鏈反應技術偵測水禽小病毒之反應條件,至少可測得至3 pg之核酸濃度,較一般PCR敏感約10~100倍,並建立核酸與循環數之線性關係,可作為核酸標準曲線之參考,進而應用於核酸定量之研究。
英文摘要:
The purpose of the study was to develop the assay of detection of warerfowl parvovirus with real-time polymerase chain reaction by proceeding with the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System coupled with SYBR green. Waterfowl parvovirus was subdivided into goose parvovirus and Muscovy duck parvovirus. According to the conserved region of GPV and MDPV respectively, the specific primers were designed for real-time PCR. The constructed real-time PCR assay has a detection limit of 3 pg. The sensitivity was 100-fold higher than common PCR. The developed linear relationship between concentration of nucleic acid and cycle numbers of reaction was could be the base of the standard curve of nucleic acid, and further, it could be applied for quantifying the nucleic acid.
備註:
年份:西元 2006 年
期別: 第 41 期
詳細內容:
水禽小病毒感染症 (waterfowl parvovirus infection) 為一高度傳染性與致死性疾病,引起纖維素性與壞死性腸炎,在許多國家都曾發生並造成經濟上的嚴重損失[3]。本病首先被描述於1956 年發生在中國的鵝隻,1981 年由Fang 和Wang 發表[2],之後並經Zheng 等確認為鵝小病毒 (goose parvovirus, GPV)感染[3]。在1960 年代歐洲地區許多國家先後發生鴨、鵝高死亡率之疾病,直至1971 年才由Schettler 證實為小病毒(parvovirus)感染,1978 年再確認並稱之為鵝小病毒[3]。在台灣,首例鵝小病毒感染症病例於1983年被報告[1];此外,於1989 年由正番鴨分離到類似鵝小病毒感染症之另一型病毒,稱為正番鴨小病毒 (Muscovy duck parvovirus; MDPV),MDPV 在宿主性、抗原性及序列上均異於前者。GPV 對鵝及正蕃鴨均有高病原性,主要病徵為腸炎,感染率及死亡率甚高[3];MDPV 對鵝隻並無病原性,然所有鴨品系對MDPV均有感受性,其特徵為病鴨軟腳及癒後發育不良及短嘴,死亡率也高達70 ﹪以上[11]。  水禽小病毒的分離可利用鵝或正番鴨胚胎蛋進行尿囊腔的接種[3],然鵝或正番鴨有一定之繁殖季節,使其胚胎蛋之取得不易;而本病的監測診斷可利用血清學方法,如ELISA、膠體沉澱試驗 (agar gel precipitation test) 或中和試驗[4,10],但是這些方法常無法簡便地進行,且無法達到快速的診斷目的。1980 年代分子生物學的發展提供另一診斷方法,如聚合?鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)乃利用偵測病毒專屬的核酸序列達到較為快速的診斷目的[6]。近年更進一步將PCR 技術與核酸產物螢光的偵測結合在一起,稱為即時聚合?鏈反應(real-time PCR),使得疾病的診斷更為快速且更具敏感性,並可進行其他研究發展[5,8,9]。本計畫即建立以real-time PCR 偵測水禽小病毒核酸,包括GPV 與MD PV,以達到本病之快速診斷。
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附件名稱:
即時聚合?鏈反應技術偵測水禽小病毒
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