篇名:
應用細胞培養技術分離結核分枝桿菌Development the method of isolation of mycobacteria in tissue culture
作者:
林敬覆;楊喜金;黎南榮;蕭終融;吳義興;張惟茗;陳素貞;蘇杰夫
中文摘要:
將本所分離所得之牛型結核分枝桿菌(M.bovis-YL)株分別接種於初代豬肺臟大吞噬細胞(Swine alvoelar macrophage,SAM)及株化細胞OCC 和Marc-145,並於接種後第1,2,3,4,5,6,及7 天分別固定﹑染色與鏡檢﹐結果顯示於接種第3 天以後,上述三種細胞培養,經檢測結果,均可見到明顯的結核分枝桿菌增殖。將 PPD 皮內注射測定,判定為陽性反應牛隻之淋巴﹑臟器組織乳劑分別以斜面培養基(Lowenstein-Jensen medium,L-J M)及上述組織培養進行結核分枝桿菌分離,結果顯示以上述組 織培養分離者只需於接種後 7 及 14 天,便可以抗酸菌染色方法染色後鏡檢,即可判定有無結核分 枝桿菌增殖。而以 Slant 分離者,則需經 5~14 週菌落形成後,才可進行釣菌、固定、染色後鏡檢。 至於其分離率經分析結果組織培養及斜面培養基培養分離牛病材並無差異,均為 43.46%(33/76)。
英文摘要:
In order to develop a isolation method of mycobacteria by tissue cultures, the isolation strain of mycobacterium bovis-M.bovis YL strain was inoculated in the tissue cultures of swine alveolar macrophages (SAM),Marc-145 and OCC, respectively.The results revealed that the M. bovis-YL strain was found growth well in the above mention tissue cultures at 3 day after inoculation. The specimens collecting from the positive reaction cattle by PPD(Purified protein derivative) inoculating in slants(Lowenstein-Jensen medium,L-J M) and Marc-145 cell line , respectively, for isolating the M.bovis. The results of the above test revealed that the M. bovis was isolated at 7 to 14 days after inoculating in Marc-145 cell lines﹐and isolated at 4 to 15 weeks after culturing in slants.Both methods of isolating rate were as same as 43.46%(33/76).
備註:
年份:西元 1999 年
期別:第 35 期
詳細內容:
由於以傳統之斜面培養基(Lowenstein-Jensen medium,L-J M)分離結核分枝桿菌至少需時5至14 週(1,6),為縮短其分離時間,以提升診斷品質及時效,而自行研發改良以組織培養分離本菌(2,3,4,5,7,8,9,10,11,12),以與斜面培養基分別分離本菌之結果分析比較,以供參考。今就所使用之方法、材料及結果等,分述於下。材料與方法  首將本所分離所得之牛型結核分枝桿菌(Mycobacterium bovis ,M.bovis)分離株(M.bovis-YL)分別 接種於初代豬肺臟大吞噬細胞(Swine alvoelar macrophage,SAM)及株化細胞 OCC 和 Marc-145,並於接 種後後第 1 天起每天各取 3 片 Chamber slide 固定、抗酸菌染色、鏡檢至第 7 天。次將以 PPD 皮內注射測定,判定為陽性反應牛隻、鹿及羊之臟器淋巴組織,分別以 0.1% 之 次氯酸納溶液清洗後,浸置於 4℃下 12~24 小時,取出後以無菌剪刀細剪後,加入適量(3~5mL)之 Dubos’broth 後,以電動磨碎機( Grinder )磨碎後,加入 0.5N 之 NaOH 處理 30 分鐘後,再加入6N 之 HCl 處理 30 分鐘,最後以 1N 之 NaOH 加入中和處理 30 分鐘後,放入具有冷卻裝置之離心機以 3,000rpm 離心 30 分鐘後,倒棄上清液,將其沉澱物分別接種培養於 Chamber slide 內之 SAM 及 Marc-145、OCC 株化細胞和不含甘油之 L-J (w/o)M 及含 2﹪Tween 80 之 L-J (t80)M 卵培地之 Slant 斜面培養基試管後,分別放置內含 5%CO2,37℃之恆溫箱內培養,接種於上述組織培養者,如同上 述於接種後第 1 天起,每天分別各取 3 片 Chamber slide 固定、抗酸菌染色、鏡檢至第 7 天。在斜面 培養基培養方面則需 5~14 週菌落形成後,再行釣菌、固定,抗酸菌染色後鏡檢。以 Slant 斜面培 養基分離與接種於組織培養者之分離結果進行比較,以供分析、評估時之資料。
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附件名稱:
分離結核分枝桿菌
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