篇名:
應用複合聚合連鎖反應檢測沙門氏桿菌Detection of Salmonella by multiplex polymerase chain reaction
作者:
張惟茗;廖明輝;林敬覆;黃春申;郭靜蕙;蕭終融
中文摘要:
在獸醫、醫學或公共衛生環境保護等領域,沙門氏桿菌的檢測是一項重要但卻繁複的工作。傳統方法從檢體處理、培養至鑑定常需耗時3 至7 天才能完成,且相當耗費人力及材料。有鑑於此,本報告利用複合聚合?連鎖反應(multiplex polymerase chain reaction, MPCR)快速及操作簡便的特點,進行invA及IS200基因檢測以輔助沙門氏桿菌之鑑定。本實驗共使用共263株分屬23種以上不同血清型之沙門氏桿菌,其中O 抗原有A、B、C1、C2、D1、D2、E1及E2群等,包括12株標準株及251株分離株進行測試。以MPCR檢測結果為除了2株H抗原歸類為z4 complex 檢測結果為陰性外,其他所有菌株之檢測結果均為陽性。450例豬糞便檢體中,以PCR檢驗有49例(10.89 %)為陽性。MPCR檢驗結果與傳統培養及鑑定法結果相符。傳統培養及鑑定法共分離到49株沙門氏桿菌分離株,其中包括12種不同血清型。50例鴨糞便檢體中,MPCR檢驗結果均為陰性,與傳統培養及鑑定結果相符。因此本方法確能有效檢出沙門氏桿菌,檢驗所需時間最長不超過18小時,可應用於沙門氏桿菌的快速輔助檢驗。
英文摘要:
A multiplex polymerase chain reaction (mPCR) assay, using two sets of primers designed according to the sequences of invA and IS200 genes, was developed for the identification of Salmonella. The mPCR assay was evaluated by using 12 seed strains and 251 isolated strains, which were attributed to more than 23 different serovars of group A, B, C1, C2, D1, D2, E1 and E2. All strain tested, except 2 possessed z4 complex (H antigen) strains, were positive in the mPCR assay. The mPCR assay was compared with the traditional culture and biological characteristics to determine the specificity and sensitivity of the test. Using a total of 450 swine fecal samples collected from slaughterhouse during 9 months, 49 samples were identified to be positive in both the mPCR assay and the traditional culture and biological characteristics. In addition, 50 duck fecal samples collected from animal house of duck were also tested, and all were found to be negative in both assays. Thus, the mPCR assay developed can be practically used as an auxiliary step for identifying Salmonella.
備註:
年份:西元 2006 年
期別: 第 41 期
詳細內容:
沙門氏桿菌症是畜產養殖業的一大困擾,感染沙門氏桿菌所引起的主要的臨床症狀包括患畜下痢、失重、生長率下降及死亡等,經常造成畜產養殖的重大經濟損失,感染沙門氏桿菌也可能引發呼吸道疾病甚或敗血症等。沙門氏桿菌感染同時是公共衛生上一個重要的議題,病原菌常藉由食物污染而感染人[14]估計在美國一年因人沙門氏桿菌感染損失接近十億美元[3]。目前政府積極推動之「危害分析重要管制點」(HACCP) 系統,強調預先防範危害的發生,以達成食品衛生安全的嚴格標準。在此衛生監督管理制度中,沙門氏桿菌的污染也是一項重點檢驗項目。因此在獸醫、醫學、公共衛生及環境保護等領域,沙門氏桿菌的污染檢測均是一項重要的工作。也因此目前市售沙門氏桿菌的鑑定套組為數眾多,例如利用生化特徵鑑定的至少有18 種、核酸分析鑑定的至少有4種、血清學鑑定則至少有25 種以上。  沙門氏桿菌屬之血清型超過2400 種,還陸續增加中。依照國內衛生署、美國FDA 或OIE 公告的傳統鑑定方法包括培養、生化試驗及血清學鑑定至少需時4-7 天。一個檢體最少需作10 種以上的生化性狀及血清學測試,所以檢體數量太多時處理相當困難。此外檢體保存不當、雜菌太多或抗生素的使用等都會影響細菌分離率,而菌落如轉變成粗糙型則會影響血清型鑑定。因此為了縮短鑑定時間,本研究研發利用聚合?連鎖反應(polymerase chain reaction,PCR)來輔助沙門氏桿菌之鑑定。
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應用複合聚合?連鎖反應檢測沙門氏桿菌
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