篇名:
應用聚酯纖維載體培養融合瘤細胞株Application of non-woven polyester fabric for cultivation of hybridoma cell line
作者:
李文榮;黃金城
中文摘要:
現今世界潮流由於動物福祉的意識盛行,以老鼠腹水生產單株抗體的方法並不適合量化生產,對於有大量抗體需求的領域而言,已有許多替代性的方法可供應用。例如以中空纖維(Hollow-fiber)之生物反應器、透析膜(Dialysis membrane)培養瓶製造單株抗體時,分別可以達到0.2~0.3 mg/mL;0.1~1.5 mg/mL抗體濃度,相較於必須不斷繼代培養且分泌抗體濃度僅20 μg/mL的角瓶培養,顯然效能更佳。本試驗以6公克聚酯纖維載體(Polyester fabric carrier)於500 mL吊籃式旋轉瓶進行融合瘤細胞株培養,接種細胞濃度為1x105 cells.mL-1,接種量430 mL。培養期間分別於第5 、6、7、8日以批次式(Batch)各換液約二分之一。自第9日起,採灌注式饋料(Perfusion feed)再繼續培養5日後終止實驗,共收集約4公升培養液。以酵素連結免疫分析法(ELISA)檢測分泌抗體濃度,並與角瓶培養法培養三日以上培養液作對照。各階段收集液抗體反應強度為對照組之2~4倍;總產能大於使用160支T175角瓶每瓶50 mL進行培養後所獲得8公升培養液抗體含量。本試驗細胞株乃分讓而來,無製備所需抗原,因此未定量抗體濃度,惟聚酯纖維載體類似中空纖維,具有高單位體積之表面積比(Surface area/volume ratio)150 cm-1,依結果顯示適合高細胞密度大量培養單融合瘤細胞株。
英文摘要:
Monoclonal antibodies(Mabs). have been widely used in biological researches, medical diagnoses and therapies. The production of Mab from ascites by mouse can make a high yield;however, the use of animals for large-scale production of Mab is restricted for the animal welfare concerns. In the current trend, many in vitro alternatives have been developed for Mab production. In this study the hybridoma cell culture was performed in a 500 mL spinner basket containing 6 g non-woven polyester fabric (NWPF) microcarrier. Cells for inoculum were prepared at density 1x105 cell.mL-1 of 430 mL culture medium. Cells were growing in batch culture until day 9 when the perfusion process was initiated. After 5 more days, culture was discontinued. During the 14 days culture period, four liters supernatant was harvested in total. ELISA was applied to evaluate the activity of secreting monoclonal antibody (Mab) from culture . According to the result, the Mab activity from spinner basket culture was 2-4 times higher than T-flask culture in control, and the Mab yield of operation was equivalent to 160 T175 flasks. Application of NWPF material could be a promising alternative to Mab production while optimal culture condition was established.
備註:
年份:西元 2006 年
期別: 第 41 期
詳細內容:
應用融合瘤細胞株製備單株抗體(Monoclonal antibody)的技術,由Milstain 和Kohler[5]於1975年首次發表後,發展至今已三十年,在免疫學範疇內已屬常規技術,在其他生命科學領域內的應用也更趨廣泛,目前已不局限在基礎科學研究和生醫檢驗領域範圍內,更有直接臨床治療學上的使用價值。  以塑膠角瓶(T-flask)靜置培養融合瘤細胞所產生的單株抗體量至多僅20 μg/mL[3],遠低於將融合瘤細胞接種BALB/C小鼠腹腔內形成腹水可達20mg/mL 單株抗體量之產量[4],.者相差懸殊。因此,目前仍以接種小鼠產生腹水為主要通用方法,以獲得大量高效價單株抗體。但此法需飼養動物,週期長,不適合工業化生產;若使用免疫缺陷性小鼠,更需配合「無特殊病原菌動物房」飼養,作業繁瑣。然而,最主要問題仍源自社會大眾對腹水小鼠承受、飼養及處理[1,3,4]。我國於1998 年11 月4 日公佈「動物保護法」,行政院農業委員會於2001 年7 月13日發佈施行「動物實驗管理小組設置辦法」要求全國凡是利用動物進行實驗之醫院、藥廠、疫苗苦痛、緊迫的關注。  近二十多年來,世界各國為因應社會期待均普遍立法採用由研究機構自我監控管理機制,透過成立實驗動物管理小組,來管理各機構對於實驗動物的使用製造廠、大專院校等機構,應於2004 年7 月12日以前依該辦法之規定,設置動物實驗管理小組,建立我國動物實驗管理制度。截至2005 年8 月底為止,已有163 個機構依法成立動物實驗管理小組[1],本所亦己於2001 年8 月7 日成立動物實驗管理小組,督導相關動物實驗以合理且人性化之動物使用方式進行。  尋找有效的活體外動物細胞培養方法,除可以簡化抗體純化的過程與降低變異性,適合開發量產製程外;同時又可以替代或降低使用動物量,符合「實驗動物使用」的考量及「動物福祉」的課題[3,4]。
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應用聚酯纖維載體培養融合瘤細胞株
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