作者:     鄧明中;林育如;宣詩玲;李敏旭;黃天祥;黃金城*;簡茂盛
中文摘要:     由於聚合酵素連鎖反應(polymerase chain reaction, PCR) 能在短時間內增幅特定基因片段,因此常被應用於許多病原核酸之偵測與診斷。但一般的PCR 需要精密的熱循環器(thermal cycler),對於田間或臨床上無此設備而又必須進行快速確診時,往往喪失先機而致疫情擴散。為克服此一狀況,許多方便可靠的核酸增幅技術被開發出來,其中又以恆溫環形核酸增幅法(loop-mediated isothermal amplification; LAMP) 最廣為應用。由於此法所需設備較為簡便且操作容易,因此我們藉由此技術來開發快速偵測豬瘟病核酸的方法。為了確認此新技術之敏感性與特異性符合診斷之需求,我們與即時定量RT-PCR (real time RT-PCR)、巢式RT-PCR (nested RT-PCR)以及傳統RT-PCR 進行比較,結果顯示RT-LAMP可偵測到約0.32 TCID50 的病量,與real time RT-PCR、nested RT-PCR 敏感度相似,遠比傳統RT-PCR敏感約1500倍,且RT-LAMP不會增幅與豬瘟病同屬的牛病性下痢病核酸,特異性非常高。因此,應用RT-LAMP核酸增幅法開發豬瘟病核酸的快速檢測技術,對於未來田間疫情的診斷將有莫大的幫助。
英文摘要:     Polymerase chain reaction(PCR) has been widely used to amplify specific nucleotide sequences from viral pathogens.However, performance of traditional PCR requires an expensive therciency, a novel method based on PCR have boon developed Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) can be carried out in a low-priced thermal bath. We therefore developed the rapid diagnostic method based on LAMP to detect classical swine fever viruses. Viral RNA evtracted from cell culture or infected samples was mixed with specific primers and DNA polymerase.
備註:     年份:西元 2009 年
期別:第 44 期
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